缓冲盐操作不当对色谱柱的影响,色谱柱性能特点

在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响：
1）柱压升高原因：

缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。
2）相同化合物的保留时间发生变化原因：
如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。
3）柱效下降原因：
1、有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；

2、凝结在键合相表面，使C18 碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

如何正确的选择毛细管色谱柱

1、柱长度的选择

分辨率与柱长的平方根成正比。在其他条件不变的情况下,为取得加倍的分辨率需有4倍的柱长。较短的柱子适于较简单的样品,尤其是由那些在结构、极性和挥发性上相差较大的组分组成的样品。

一般来说：

15m的短柱用于快速分离较简单的样品，也适于扫描分析；

30m的色谱柱是zui常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上完成；

50m、60m或更长的色谱柱用于分离比较复杂的样品。

应该注意，柱长增加分析时间也增加。

2、柱内径的选择

柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。

0.25mm：具有较高的柱效，柱容量较低。分离复杂样品较好。

0.32mm：柱效稍低于0.25mm的色谱柱，但柱容量约高60%。

0.53mm：具有类似于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样。

当柱容量是主要考虑因素时（如痕量分析），选择大口径毛细管柱较为合适。

3、液膜厚度的选择

液膜厚度影响柱子的保留特性和柱容量。厚度增加，保留也增加。

0.1～0.2μm ：薄液膜厚度的毛细管柱比厚液膜的毛细管柱洗脱组分快，所需柱温度低，且高温下柱流失较小，适用高沸点的化合物的分析。

0.25～0.5μm ：常用的液膜厚度。

0.6～5.0μm : 厚液膜，对分析低沸点的化合物较为有利。